畜牧兽医学报 ›› 2015, Vol. 46 ›› Issue (6): 896-902.doi: 10.11843/j.issn.0366-6964.2015.06.004
刘志永,左其生,肖天荣,韦光辉,陈庭峰,朱睿,张振韬,王怡临,蒋舒颖,张亚妮,李碧春*
LIU Zhi-yong,ZUO Qi-sheng,XIAO Tian-rong,WEI Guang-hui,CHEN Ting-feng,ZHU Rui,ZHANG Zhen-tao,WANG Yi-lin,JIANG Shu-ying,ZHANG Ya-ni,LI Bi-chun*
摘要:
旨在确定鸡Stra8基因启动子的主要调控区域,预测调控元件结合位点,探索用他米巴洛丁(Am80)或曲古抑菌素(TSA)诱导对Stra8启动子活性的调控作用。将鸡Stra8基因5′侧翼系列缺失片段插入到pGL3-basic载体构建重组质粒,并转染DF-1和GC-1,通过检测荧光素酶活性和预测启动子区域调控元件的结合位点,选取合适的启动子片段并构建其重组质粒Stra8-EGFP;将Am80和TSA分别按一定的浓度梯度诱导转染细胞,进行荧光素酶活性检测以筛选最佳诱导浓度;用最适剂量的Am80和TSA分别单独或联合诱导转染重组质粒Stra8-EGFP的P19,并检测各诱导组的绿色荧光表达程度。结果表明,鸡Stra8基因启动子-1 055~+54 bp片段的活性较强,且含有RARα、RXRα和RARβ的结合位点;分别单独或联合使用Am80和TSA对转染的细胞进行诱导,结果显示,Am80和TSA协同作用的荧光素酶活性最高;重组质粒Stra8-EGFP转染细胞后,用Am80(10-5 mol•L-1)和TSA(10-6 mol•L-1)联合诱导可见绿色荧光强度最强。本研究成功分析了鸡Stra8基因启动子的活性和调控元件的结合位点,确定Am80和TSA共同诱导可显著提高Stra8基因启动子调控活性。
中图分类号: